Tabla de Contenidos
Đây là một trong những quy trình phổ biến nhất được biết đến để trích xuất vật liệu di truyền thực vật và có thể quan sát nó dưới kính hiển vi. Nó cũng có thể được làm bằng cà chua, chanh dây hoặc các loại trái cây khác. Trong trường hợp này, một quả chuối được sử dụng do cách xử lý đơn giản và vài bước cần thiết để nghiền nát nó trong thí nghiệm của chúng tôi.
Để trích xuất DNA từ chuối hoặc chuối, bạn cần:
- Một chuối hoặc chuối.
- Một con dao rất sắc.
- Một cái nĩa hoặc dụng cụ nghiền khoai tây.
- Bột giặt dạng lỏng hoặc xà phòng giặt.
- nước khoáng.
- Một chút muối.
- Natri bicacbonat.
- Một cái phễu.
- Giấy nhà bếp hoặc bộ lọc giấy.
- Rượu rất lạnh.
- Thùng chứa bất kỳ vật liệu nào để thực hiện các bước. Một sẽ cần thiết cho chuối nghiền và một cho xà phòng và natri. Sẽ rất hữu ích nếu bạn trộn hỗn hợp cuối cùng trong một hộp đựng trong suốt để bạn có thể dễ dàng nhìn thấy bên trong từ bên ngoài.
- Ống hút thủy tinh hoặc nhựa, tốt nhất là trong suốt. Ngoài ra, bạn cũng nên có một chiếc kim đan có móc trên tay.
Hãy nhớ tránh sử dụng các dụng cụ có thể bị nhiễm bẩn để nghiền nát trái cây. Ví dụ: dụng cụ bào phô mai có thể có vết chất béo khi được sử dụng và chúng tôi không muốn những vết này làm nhiễm bẩn mẫu cuối cùng.
bước
- Bước đầu tiên sẽ bao gồm cắt chuối thành từng miếng nhỏ. Tiếp theo, bạn tiện nghiền chuối sao cho thật nhuyễn. Bằng cách này, bạn sẽ phá vỡ các tế bào chứa DNA của loại quả này.
- Có tính đến việc các tế bào thường được bao phủ bởi một màng lipid, chúng ta sẽ cần một phương pháp bổ sung để phá vỡ chúng triệt để hơn. Đối với điều này, trong bước tiếp theo, chúng tôi sẽ tạo một giải pháp trong một thùng chứa riêng. Dung dịch này thường được gọi là dung dịch đệm ly giải trong giới hóa học hàn lâm.
Để tạo dung dịch đệm ly giải, chúng ta phải lấy chất lỏng hoặc xà phòng giặt và một cốc nước khoáng rồi pha loãng. Nếu đó là chất lỏng, hai tia của nó sẽ đủ để tạo màu cho nước. Nếu là bột giặt, một muỗng canh đầy là đủ.
Chất tẩy rửa sẽ thực hiện chức năng kéo theo lipid (là một loại chất béo) và protein (là một loại chất dinh dưỡng đa lượng thiết yếu) hòa tan trong lipid. Chúng ta cũng phải thêm vào hỗn hợp này hai thìa cà phê muối và sáu thìa cà phê muối nở. Natri trong hai hợp chất này, cùng với các ion dương của nó, tạo điều kiện cho sự toàn vẹn của các chuỗi tạo nên DNA. Đặc biệt, bicarbonate sẽ chịu trách nhiệm trung hòa độ pH của dung dịch, để ngăn DNA bị hư hại. Các chuỗi DNA hiện không được bảo vệ vì chúng đã bị loại bỏ các chất béo từng bao phủ chúng.
- Bây giờ chúng ta sẽ dùng đến một phương pháp tách vật lý. Những gì chúng ta cần làm là thêm vật liệu sinh học mà chúng ta đã chiết xuất ở bước 1 vào dung dịch tẩy rửa. Chúng ta lấy bốn muỗng canh và trộn chúng trong ít nhất ba phút, tối đa là năm phút.
Với giấy ăn hoặc bộ lọc cà phê như một bộ lọc thô sơ và sự trợ giúp của một cái phễu, chúng tôi đặt một trong những bộ lọc này vào phễu và đổ chất lỏng của hỗn hợp vào bình chứa. Cuối cùng, từ hỗn hợp này, chúng ta sẽ trích xuất mẫu DNA cần quan sát.
Tại thời điểm này, chúng ta sẽ có dung dịch ở pha nước và chúng ta có thể dễ dàng thu thập vật liệu di truyền của mình. Dung dịch chứa RNA, DNA và một số protein hòa tan trong nước.
tách hóa chất
Bây giờ chúng tôi sẽ giải thích phương pháp tách hóa học, tận dụng các đặc tính hóa học của các phân tử của vật liệu sinh học mà chúng tôi sẽ tách. Chúng tôi sẽ sử dụng 5 ml dung dịch mà chúng tôi vừa lọc. Chúng tôi trộn với một lượng cồn lạnh có thể tích gấp ba lần, trong trường hợp này là 15 ml. Nhiệt độ lạnh của rượu sẽ đảm bảo hiệu suất của phương pháp tốt hơn. Do phần dung dịch sinh học chứa DNA không hòa tan trong cồn nên chúng ta sẽ thấy cách nó kết tụ và tách ra khỏi các phần tử khác, tạo thành một lớp có thể dễ dàng nhận biết bằng mắt thường.
Điều quan trọng cần lưu ý là rượu phải được thêm từ từ, tốt nhất là bằng cách trượt rượu dọc theo các cạnh của vật chứa nơi dung dịch nước đang chờ. Chúng tôi cũng đang cố gắng không làm hỏng DNA, thứ mà chúng tôi có thể muốn xem xét dưới kính hiển vi sau này.
Bây giờ chúng ta có thể phân biệt dung dịch đục mang DNA của mẫu của chúng ta, chúng ta sẽ tiến hành tách nó ra khỏi môi trường nước. Chúng tôi lấy ống hút và đưa nó vào môi trường nước cho đến khi nó chạm vào dung dịch đã chuẩn bị trước đó. Ngay sau đó, chúng tôi dùng ngón tay bịt đầu ngoài của ống hút để bịt lỗ rò rỉ khí và dùng để giữ dung dịch. Nếu chúng tôi không thể làm cho dung dịch dính vào đầu ống hút, chúng tôi rút nó ra mà không cần nhấc ngón tay ra khỏi đầu kia và tiếp tục lặp lại quy trình, đảm bảo rằng ống hút ít nhất đã nhìn thấy được vào môi trường đậm đặc chứa vật chất.di truyền. Chúng tôi đặt ngón tay của mình ở đầu đối diện, đậy kỹ và cố gắng từng chút một lấy môi trường này ra khỏi dung dịch nước, từ từ di chuyển ống hút ra ngoài.
Có khả năng là chúng ta sẽ gặp khó khăn trong việc lấy dung dịch cuối cùng này, vì vậy nếu phương pháp trước đó không thành công, chúng ta có thể sử dụng kim đan có đầu móc hướng xuống dưới để lấy phần dung dịch đặc này ra khỏi môi trường nước.
Bây giờ chúng ta đã có dung dịch DNA thực vật sẵn sàng để xem dưới kính hiển vi. Nên đặt ngay vào đĩa Petri hoặc dụng cụ tương tự để tránh nhiễm bẩn.
Người giới thiệu
Giáo dục và Sáng tạo. (s/f). Làm thế nào để trích xuất DNA từ thực vật? Có tại: https://www.educaycrea.com/2015/09/como-extraer-el-adn-de-un-vegetal/
Ochoa, J. (2010). Trích xuất DNA với vật liệu nhà bếp. Có sẵn: https://www.youtube.com/watch?v=PkjtFM_UVxk&t=243s
