Bir muzdan DNA nasıl çıkarılır

Bu, bitki genetik materyalini çıkarmak ve onu mikroskop altında gözlemleyebilmek için en popüler bilinen süreçlerden biridir. Domates, çarkıfelek meyvesi veya diğer meyvelerle de yapılabilir. Bu durumda, basit kullanım şekli ve deneyimizde onu ezmek için gereken birkaç adım nedeniyle bir muz kullanılmıştır.

Muz veya muzdan DNA elde etmek için şunlara ihtiyacınız vardır:

• Bir muz veya muz.
• Çok keskin bir bıçak.
• Çatal veya patates ezici.
• Sıvı deterjan veya çamaşır sabunu.
• Maden suyu.
• Biraz tuz.
• Sodyum bikarbonat.
• Huni.
• Mutfak kağıdı veya kağıt filtreler.
• Çok soğuk alkol.
• Adımları gerçekleştirmek için herhangi bir malzemeden kaplar. Biri ezilmiş muz için, diğeri ise sabun ve sodyum için gerekli olacaktır. Son karışımı, içeriğini dışarıdan kolayca görebileceğiniz şeffaf bir kapta yapmanız yararlı olacaktır.
• Cam veya plastik saman, tercihen şeffaf. Alternatif olarak, elinizde kanca ucu olan bir örgü iğnesi bulundurmak da iyi bir fikirdir.

Meyveyi ezmek için kontamine olabilecek kapları kullanmaktan kaçınmayı unutmayın. Örneğin bir peynir rendesi kullanıldığında eser miktarda yağ içerebilir ve bunların nihai numuneyi kirletmesini istemeyiz.

Adımlar

• İlk adım, muzun küçük parçalar halinde kesilmesinden oluşacaktır. Daha sonra muzu püre haline getirmek için ezmek uygundur. Bunu yaparak, bu meyvenin DNA’yı içeren hücrelerini kırmış olacaksınız.
• Hücrelerin genellikle lipid bir zarla kaplı olduğunu dikkate alırsak, onları daha iyi parçalamak için ek bir yönteme ihtiyacımız olacak. Bunun için bir sonraki adımda ayrı bir kapta çözüm üreteceğiz. Bu çözeltiye genellikle akademik kimya çevrelerinde lizis tamponu denir.

Lizis tamponunu yapmak için sıvı veya çamaşır sabunu ve bir bardak maden suyu almalı ve seyreltmeliyiz. Sıvı ise, suyu renklendirmek için iki jet yeterli olacaktır. Toz deterjan ise bir tepeleme yemek kaşığı yeterli olacaktır.

Deterjan, lipidlerde çözünen lipitleri (bir tür yağ olan) ve proteinleri (bir tür temel makro besin maddesi) sürükleme işlevini yerine getirecektir. Ayrıca bu karışıma iki çay kaşığı tuz ve altı çay kaşığı kabartma tozu eklemeliyiz. Bu iki bileşikteki sodyum, pozitif iyonları ile DNA’yı oluşturan zincirlerin bütünlüğünü kolaylaştırır. Özellikle bikarbonat, DNA’nın zarar görmesini önlemek için çözeltinin pH’ını nötralize etmekten sorumlu olacaktır. DNA iplikçikleri artık korumasız çünkü kendilerini kaplamak için kullanılan lipitlerden sıyrıldılar.

• Şimdi fiziksel bir ayırma yöntemine başvuracağız. Yapmamız gereken, 1. adımda çıkardığımız biyolojik materyali deterjan solüsyonumuza eklemek. Dört yemek kaşığı alıp en az üç, en fazla beş dakika olacak şekilde karıştırıyoruz.

İlkel filtre olarak mutfak kağıdı veya kahve filtreleri ile ve bir huni yardımıyla bu filtrelerden birini huniye yerleştirip karışımımızın sıvısını kaba döküyoruz. Nihayet gözlemlenecek DNA örneğini bu karışımdan çıkaracağız. 

Bu noktada sulu fazda solüsyonumuzu elde etmiş olacağız ve genetik materyalimizi kolaylıkla toplayabiliriz. Çözelti, RNA, DNA ve suda çözünen bazı proteinleri içerir.

kimyasal ayırma

Şimdi ayrıştıracağımız biyolojik materyalin moleküllerinin kimyasal özelliklerinden yararlanarak kimyasal ayırma yöntemini anlatacağız. Az önce süzdüğümüz solüsyondan 5 ml kullanacağız. Hacmi üç katına çıkaran bir miktar soğuk alkolle karıştırıyoruz, bu durumda 15 ml. Alkolün soğuk sıcaklığı, yöntemin daha iyi performans göstermesini garanti edecektir. Biyolojik çözeltinin DNA içeren kısmı alkolde çözünmediği için nasıl topaklaştığını ve diğer elementlerden nasıl ayrıldığını, çıplak gözle kolayca tanınabilen bir tabaka oluşturduğunu göreceğiz.

Alkolün yavaşça, tercihen sulu çözeltinin beklediği kabın kenarları boyunca kaydırılarak eklenmesi gerektiğini dikkate almak önemlidir. Daha sonra mikroskop altında bakmak isteyebileceğimiz DNA’ya da zarar vermemeye çalışıyoruz.

Artık örneğimizin DNA’sını taşıyan bulutlu çözeltiyi ayırt edebileceğimize göre, onu sulu ortamdan ayırmaya geçebiliriz. Pipeti alıp önceden hazırlanmış çözeltiye değene kadar sulu ortama sokuyoruz. Hemen ardından hava kaçağını kapatmak ve solüsyonu tutmaya yaraması için pipetin dış ucunu parmağımızla kapatıyoruz. Çözeltinin pipetin ucuna yapışmasını sağlayamazsak, diğer ucundan parmağımızı hiç çekmeden çekip pipetin en azından gözle görülür şekilde yoğun ortama girdiğinden emin olarak işlemi tekrarlıyoruz. malzeme, genetik. Parmağımızı diğer uca yerleştirip iyice kapatıyoruz ve pipeti yavaşça dışarı doğru hareket ettirerek bu ortamı sulu çözeltiden azar azar çıkarmaya çalışıyoruz.

Bu son çözeltiyi yakalamakta zorlanacağız, bu nedenle önceki yöntemde başarılı olamazsak, çözeltinin bu kalın kısmını sulu ortamdan çıkarmak için kanca ucu aşağı gelecek şekilde örgü iğnesini kullanabiliriz.

Artık bitki DNA çözümümüzü mikroskop altında incelemeye hazır hale getirdik. Kirlenmeyi önlemek için hemen bir Petri kabına veya benzeri bir alete yerleştirilmesi önerilir.

Referanslar

Eğitin ve Oluşturun. (s/f). Bir bitkiden DNA nasıl çıkarılır? Şu adreste mevcuttur: https://www.educaycrea.com/2015/09/como-extraer-el-adn-de-un-vegetal/

Ochoa, J. (2010). Mutfak malzemesi ile DNA ekstraksiyonu. Mevcut: https://www.youtube.com/watch?v=PkjtFM_UVxk&t=243s