Hur man extraherar DNA från en banan

Detta är en av de mest populära processerna för att extrahera växtgenetiskt material och kunna observera det i mikroskop. Den kan också göras med tomater, passionsfrukt eller andra frukter. En banan används, i det här fallet, på grund av det enkla sättet att hantera den och de få steg som krävs för att krossa den i vårt experiment.

För att extrahera DNA från en groblad eller banan behöver du:

• En groblad eller banan.
• En mycket vass kniv.
• En gaffel eller en potatisstöt.
• Flytande tvättmedel eller tvättmedel.
• Mineral vatten.
• Lite salt.
• Natriumbikarbonat.
• En tratt.
• Hushållspapper eller pappersfilter.
• Mycket kall alkohol.
• Behållare av något material för att utföra stegen. En kommer att behövas för den mosade bananen och en annan för tvålen och natriumet. Det är till hjälp om du gör den slutliga mixen i en genomskinlig behållare där du enkelt kan se innehållet från utsidan.
• Halm av glas eller plast, gärna genomskinligt. Alternativt är det också bra att ha en sticka med en krokpunkt till hands.

Kom ihåg att undvika att använda redskap som kan vara förorenade för att krossa frukten. En osthyvel, till exempel, kan ha spår av fett när den används, och vi vill inte att dessa ska kontaminera det slutliga provet.

Steg

• Det första steget kommer att bestå av att skära bananen i små bitar. Därefter är det bekvämt att krossa bananen så att det blir en puré. Genom att göra detta kommer du att bryta sönder cellerna i denna frukt, som innehåller DNA.
• Med hänsyn till att celler i allmänhet täcks av ett lipidmembran, kommer vi att behöva en ytterligare metod för att bryta dem mer grundligt. För detta kommer vi i nästa steg att göra en lösning i en separat behållare. Denna lösning kallas ofta lysisbuffert i akademiska kemikretsar.

För att göra lyseringsbufferten måste vi ta flytande tvål eller tvättmedel och en kopp mineralvatten och späda ut det. Om det är vätskan räcker det med två strålar för att färga vattnet. Är det pulvertvättmedel räcker det med en rågad matsked.

Tvättmedlet kommer att utföra funktionen att dra lipider (som är en typ av fett) och proteiner (en typ av väsentliga makronäringsämnen) som är lösliga i lipider. Vi måste också lägga till denna blandning två teskedar salt och sex teskedar bakpulver. Natriumet i dessa två föreningar, med sina positiva joner, underlättar integriteten hos strängarna som utgör DNA. Särskilt bikarbonatet kommer att ansvara för att neutralisera lösningens pH, för att förhindra att DNA skadas. DNA-strängarna är nu oskyddade eftersom de har tagits bort från lipiderna som brukade täcka dem.

• Vi kommer nu att tillgripa en fysisk separationsmetod. Det vi behöver göra är att tillsätta det biologiska materialet som vi extraherade i steg 1 till vår tvättmedelslösning. Vi tar fyra matskedar och blandar dem i minst tre minuter, med max fem minuter.

Med hushållspappret eller kaffefiltren som ett rudimentärt filter och med hjälp av en tratt placerar vi ett av dessa filter i tratten och häller vätskan av vår blandning i behållaren. Det kommer att vara från denna blandning som vi slutligen kommer att extrahera DNA-provet som ska observeras. 

Vid det här laget kommer vi att ha vår lösning i en vattenfas och vi kan enkelt samla upp vårt genetiska material. Lösningen innehåller RNA, DNA och vissa proteiner som är lösliga i vatten.

kemisk separation

Nu kommer vi att förklara den kemiska separationsmetoden och dra nytta av de kemiska egenskaperna hos molekylerna i det biologiska materialet som vi kommer att separera. Vi kommer att använda 5 ml av lösningen som vi just har filtrerat. Vi blandar med en mängd kall alkohol som tredubblar den i volym, i det här fallet 15 ml. Den kalla temperaturen på alkoholen garanterar en bättre prestanda av metoden. Eftersom den del av den biologiska lösningen som innehåller DNA inte är löslig i alkohol kommer vi att se hur den agglomereras och separeras från de andra elementen och bildar ett lager som är lätt att känna igen med blotta ögat.

Det är viktigt att tänka på att alkoholen måste tillsättas långsamt, helst genom att skjuta den längs kanterna på behållaren där vattenlösningen väntar. Vi försöker också att inte skada DNA:t, som vi kanske vill titta på under ett mikroskop senare.

Nu när vi kan urskilja den grumliga lösningen som bär DNA från vårt prov, kommer vi att fortsätta att extrahera det från det vattenhaltiga mediet. Vi tar sugröret och introducerar det i det vattenhaltiga mediet tills det berör den tidigare beredda lösningen. Omedelbart efteråt täcker vi den yttre änden av sugröret med ett finger för att täcka luftläckan och att den tjänar till att hålla lösningen. Om vi ​​inte kan få lösningen att fästa vid spetsen av sugröret, drar vi ut den utan att någonsin ta bort fingret från den andra änden och fortsätter att upprepa processen, och ser till att halmen åtminstone synligt har kommit in i det täta mediet som innehåller materialet genetiskt. Vi placerar fingret i den motsatta änden, täcker det väl och försöker lite i taget att extrahera detta medium från den vattenhaltiga lösningen, långsamt flytta halmen utåt.

Det är troligt att vi kommer att ha svårt att fånga denna sista lösning, så om vi inte lyckas med den tidigare metoden skulle vi kunna använda stickan med kroken nedåt för att extrahera denna tjocka del av lösningen från det vattenhaltiga mediet.

Vi har nu vår växt-DNA-lösning redo att ses i mikroskop. Det rekommenderas att omedelbart placera det i en petriskål eller liknande redskap för att undvika kontaminering.

Referenser

Utbilda och skapa. (s/f). Hur extraherar man DNA från en växt? Tillgänglig på: https://www.educaycrea.com/2015/09/como-extraer-el-adn-de-un-vegetal/

Ochoa, J. (2010). DNA-extraktion med köksmaterial. Tillgänglig: https://www.youtube.com/watch?v=PkjtFM_UVxk&t=243s