Cum se extrage ADN dintr-o banană

Acesta este unul dintre cele mai cunoscute procese de extragere a materialului genetic al plantelor și de a-l putea observa la microscop. Se poate face si cu rosii, fructul pasiunii sau alte fructe. O banană este folosită, în acest caz, datorită modului simplu de manipulare și a câțiva pași necesari pentru a o zdrobi în experimentul nostru.

Pentru a extrage ADN dintr-o pătlagină sau banană, aveți nevoie de:

• O pătlagină sau o banană.
• Un cuțit foarte ascuțit.
• O furculiță sau un zdrobitor de cartofi.
• Detergent lichid sau săpun de rufe.
• Apă minerală.
• Puțină sare.
• Bicarbonat de sodiu.
• O pâlnie.
• Hârtie de bucătărie sau filtre din hârtie.
• Alcool foarte rece.
• Recipiente din orice material pentru a efectua etapele. Unul va fi necesar pentru piureul de banane și altul pentru săpun și sodiu. Este util dacă faceți amestecul final într-un recipient transparent unde puteți vedea cu ușurință conținutul din exterior.
• Paie din sticla sau plastic, de preferinta transparenta. Alternativ, este, de asemenea, o idee bună să aveți la îndemână un ac de tricotat cu un vârf de cârlig.

Nu uitați să evitați să folosiți ustensile care ar putea fi contaminate pentru a zdrobi fructele. O răzătoare pentru brânză, de exemplu, ar putea avea urme de grăsime atunci când este folosită și nu vrem ca acestea să contamineze proba finală.

Pași

• Primul pas va consta în tăierea bananei în bucăți mici. În continuare, este convenabil să zdrobiți banana astfel încât să fie un piure. Făcând acest lucru, vei sparge celulele acestui fruct, care conțin ADN-ul.
• Tinand cont de faptul ca celulele sunt in general acoperite de o membrana lipidica, vom avea nevoie de o metoda suplimentara pentru a le sparge mai temeinic. Pentru aceasta, în pasul următor vom face o soluție într-un recipient separat. Această soluție este adesea numită tampon de liză în cercurile academice de chimie.

Pentru a face tamponul de liză trebuie să luăm săpun lichid sau de rufe și o cană de apă minerală și să-l diluăm. Dacă este lichid, două jeturi din acesta vor fi suficiente pentru a colora apa. Dacă este detergent praf, va fi suficientă o lingură grămadă.

Detergentul va îndeplini funcția de trage de lipide (care sunt un tip de grăsime) și proteine ​​(un tip de macronutrient esențial) care sunt solubile în lipide. Mai trebuie să adăugăm la acest amestec două lingurițe de sare și șase lingurițe de bicarbonat de sodiu. Sodiul din acești doi compuși, cu ionii săi pozitivi, facilitează integritatea catenelor care alcătuiesc ADN-ul. Bicarbonatul în special va fi responsabil de neutralizarea pH-ului soluției, pentru a preveni deteriorarea ADN-ului. Șuvițele de ADN sunt acum neprotejate, deoarece au fost îndepărtate de lipidele care obișnuiau să le acopere.

• Vom recurge acum la o metodă de separare fizică. Ceea ce trebuie să facem este să adăugăm în soluția noastră de detergent materialul biologic pe care l-am extras în pasul 1. Luăm patru linguri și le amestecăm timp de cel puțin trei minute, cu maximum cinci minute.

Cu hârtia de bucătărie sau filtrele de cafea ca filtru rudimentar și cu ajutorul unei pâlnii, punem unul dintre aceste filtre în pâlnie și turnăm lichidul amestecului nostru în recipient. Din acest amestec vom extrage în final proba de ADN pentru a fi observată. 

În acest moment vom avea soluția noastră într-o fază apoasă și ne putem colecta cu ușurință materialul genetic. Soluția conține ARN, ADN și unele proteine ​​care sunt solubile în apă.

separare chimică

Acum vom explica metoda de separare chimică, profitând de caracteristicile chimice ale moleculelor materialului biologic pe care îl vom separa. Vom folosi 5 ml din soluția pe care tocmai am filtrat-o. Amestecam cu o cantitate de alcool rece care isi tripleaza volumul, in acest caz, 15 ml. Temperatura rece a alcoolului va garanta o performanță mai bună a metodei. Deoarece partea din soluția biologică care conține ADN nu este solubilă în alcool, vom vedea cum se aglomerează și se separă de celelalte elemente, formând un strat ușor de recunoscut cu ochiul liber.

Este important de luat în considerare că alcoolul trebuie adăugat lent, de preferință prin alunecarea lui de-a lungul marginilor recipientului unde așteaptă soluția apoasă. Încercăm, de asemenea, să nu deterioram ADN-ul, pe care ar putea dori să-l vedem la microscop mai târziu.

Acum că putem distinge soluția tulbure care poartă ADN-ul probei noastre, vom proceda la extragerea acesteia din mediul apos. Luam paiele si il introducem in mediul apos pana atinge solutia preparata anterior. Imediat dupa aceea acoperim cu un deget capatul exterior al paiului pentru a acoperi scurgerea de aer si ca acesta sa serveasca la retinerea solutiei. Dacă nu reușim să facem ca soluția să adere la vârful paiului, o extragem fără să ne scoatem vreodată degetul de la celălalt capăt și procedăm la repetarea procesului, asigurându-ne că paiul a intrat cel puțin vizibil în mediul dens care conține materialul.genetic. Așezăm degetul la capătul opus, acoperindu-l bine și încercăm încetul cu încetul să extragem acest mediu din soluția apoasă, mișcând încet paiele spre exterior.

Probabil că vom avea greu să prindem această ultimă soluție, așa că dacă nu reușim cu metoda anterioară, am putea folosi acul de tricotat cu vârful cârligului în jos pentru a extrage această parte groasă a soluției din mediul apos.

Acum avem soluția noastră de ADN din plante pregătită pentru a fi văzută la microscop. Se recomandă plasarea imediată într-o cutie Petri sau o ustensil similar pentru a evita contaminarea.

Referințe

Educați și Creați. (s/f). Cum se extrage ADN-ul dintr-o plantă? Disponibil la: https://www.educaycrea.com/2015/09/como-extraer-el-adn-de-un-vegetal/

Ochoa, J. (2010). Extracția ADN cu material de bucătărie. Disponibil: https://www.youtube.com/watch?v=PkjtFM_UVxk&t=243s