Como extrair DNA de uma banana

Este é um dos processos mais conhecidos popularmente para extrair material genético vegetal e poder observá-lo ao microscópio. Também pode ser feito com tomate, maracujá ou outras frutas. A banana é utilizada, neste caso, pela simplicidade de seu manuseio e pelos poucos passos necessários para esmagá-la em nosso experimento.

Para extrair o DNA de uma banana ou banana, você precisa de:

• Uma banana ou banana.
• Uma faca muito afiada.
• Um garfo ou um espremedor de batatas.
• Detergente líquido ou sabão em pó.
• Água mineral.
• Um pouco de sal.
• Bicarbonato de Sódio.
• Um funil.
• Papel de cozinha ou filtros de papel.
• Álcool muito frio.
• Recipientes de qualquer material para realizar as etapas. Será necessário um para o purê de banana e outro para o sabão e o sódio. É útil se você fizer a mistura final em um recipiente transparente onde possa ver facilmente o conteúdo do lado de fora.
• Canudo de vidro ou plástico, de preferência transparente. Como alternativa, também é uma boa ideia ter uma agulha de tricô com ponta de gancho à mão.

Lembre-se de evitar o uso de utensílios que possam estar contaminados para esmagar a fruta. Um ralador de queijo, por exemplo, pode ter vestígios de gordura ao ser utilizado, e não queremos que isso contamine a amostra final.

Passos

• O primeiro passo consistirá em cortar a banana em pedaços pequenos. A seguir, convém amassar a banana para que fique um purê. Fazendo isso você estará quebrando as células dessa fruta, que contém o DNA.
• Levando em conta que as células geralmente são cobertas por uma membrana lipídica, precisaremos de um método adicional para rompê-las mais profundamente. Para isso, na próxima etapa faremos uma solução em um recipiente separado. Essa solução costuma ser chamada de tampão de lise nos círculos acadêmicos de química.

Para fazer o tampão de lise, devemos tomar sabão líquido ou em pó e um copo de água mineral e diluí-lo. Se for o líquido, dois jatos dele serão suficientes para colorir a água. Se for detergente em pó, basta uma colher de sopa bem cheia.

O detergente cumprirá a função de arrastar os lípidos (que são um tipo de gordura) e as proteínas (um tipo de macronutriente essencial) que são solúveis em lípidos. Devemos também adicionar a esta mistura duas colheres de chá de sal e seis colheres de chá de bicarbonato de sódio. O sódio desses dois compostos, com seus íons positivos, facilita a integridade das fitas que compõem o DNA. O bicarbonato em particular se encarregará de neutralizar o pH da solução, para evitar que o DNA seja danificado. As fitas de DNA agora estão desprotegidas porque foram despojadas dos lipídios que costumavam cobri-las.

• Vamos agora recorrer a um método de separação física. O que precisamos fazer é adicionar à nossa solução de detergente o material biológico que extraímos na etapa 1. Pegamos quatro colheres de sopa e misturamos por pelo menos três minutos, no máximo cinco minutos.

Com o papel de cozinha ou os filtros de café como filtro rudimentar e com a ajuda de um funil, colocamos um desses filtros no funil e despejamos o líquido da nossa mistura no recipiente. Será dessa mistura que finalmente extrairemos a amostra de DNA a ser observada. 

Neste ponto teremos nossa solução em fase aquosa e poderemos facilmente coletar nosso material genético. A solução contém RNA, DNA e algumas proteínas solúveis em água.

separação química

Agora explicaremos o método de separação química, aproveitando as características químicas das moléculas do material biológico que iremos separar. Usaremos 5 ml da solução que acabamos de filtrar. Misturamos com uma quantidade de álcool gelado que triplica em volume, no caso, 15 ml. A temperatura fria do álcool garantirá um melhor desempenho do método. Como a parte da solução biológica que contém o DNA não é solúvel em álcool, veremos como ele se aglomera e se separa dos demais elementos, formando uma camada facilmente reconhecível a olho nu.

É importante considerar que o álcool deve ser adicionado aos poucos, de preferência deslizando-o pelas bordas do recipiente onde aguarda a solução aquosa. Também estamos tentando não danificar o DNA, que talvez queiramos examinar ao microscópio mais tarde.

Agora que podemos distinguir a solução turva que carrega o DNA de nossa amostra, procederemos à extração do meio aquoso. Pegamos o canudo e introduzimos no meio aquoso até tocar na solução previamente preparada. Logo em seguida, tapamos a ponta externa do canudo com um dedo para tapar o vazamento de ar e que ele sirva para reter a solução. Se não conseguirmos que a solução adira à ponta da palhinha, extraímos sem nunca retirar o dedo da outra ponta e procedemos a repetir o processo, certificando-nos de que a palhinha entrou pelo menos visivelmente no meio denso que contém o material, genético. Colocamos o dedo na ponta oposta, cobrindo-o bem, e tentamos aos poucos extrair esse meio da solução aquosa, movendo lentamente o canudo para fora.

É provável que tenhamos dificuldade em pegar esta última solução, portanto, se não obtivermos sucesso com o método anterior, poderíamos usar a agulha de tricô com a ponta do gancho para baixo para extrair essa parte espessa da solução do meio aquoso.

Agora temos nossa solução de DNA vegetal pronta para ser vista ao microscópio. Recomenda-se colocá-lo imediatamente em uma placa de Petri ou utensílio similar para evitar contaminação.

Referências

Educar e Criar. (s/f). Como extrair DNA de uma planta? Disponível em: https://www.educaycrea.com/2015/09/como-extraer-el-adn-de-un-vegetal/

Ochoa, J. (2010). Extração de DNA com material de cozinha. Disponível: https://www.youtube.com/watch?v=PkjtFM_UVxk&t=243s