Cara mengekstrak DNA dari pisang

Ini adalah salah satu proses yang paling terkenal untuk mengekstrak materi genetik tanaman dan dapat mengamatinya di bawah mikroskop. Bisa juga dibuat dengan tomat, markisa atau buah lainnya. Pisang digunakan, dalam hal ini, karena cara penanganannya yang sederhana dan beberapa langkah yang diperlukan untuk menghancurkannya dalam percobaan kami.

Untuk mengekstraksi DNA dari pisang raja atau pisang, Anda memerlukan:

• Pisang raja atau pisang.
• Pisau yang sangat tajam.
• Garpu atau penghancur kentang.
• Deterjen cair atau sabun cuci.
• Air mineral.
• Sedikit garam.
• Natrium bikarbonat.
• Corong.
• Kertas dapur atau filter kertas.
• alkohol yang sangat dingin.
• Wadah dari bahan apa saja untuk melakukan langkah-langkahnya. Satu akan dibutuhkan untuk pisang tumbuk dan satu lagi untuk sabun dan natrium. Akan sangat membantu jika Anda membuat campuran akhir dalam wadah bening di mana Anda dapat dengan mudah melihat isinya dari luar.
• Gelas atau sedotan plastik, sebaiknya transparan. Alternatifnya, ada baiknya juga memiliki jarum rajut dengan ujung pengait.

Ingatlah untuk menghindari penggunaan peralatan yang dapat terkontaminasi untuk menghancurkan buah. Parutan keju, misalnya, dapat memiliki sisa lemak saat digunakan, dan kami tidak ingin ini mencemari sampel akhir.

Langkah

• Langkah pertama adalah memotong pisang menjadi potongan-potongan kecil. Selanjutnya, akan lebih mudah untuk menghancurkan pisang menjadi pure. Dengan melakukan ini, Anda akan menghancurkan sel-sel buah ini yang mengandung DNA.
• Mempertimbangkan bahwa sel umumnya ditutupi oleh membran lipid, kita memerlukan metode tambahan untuk memecahnya secara lebih menyeluruh. Untuk ini, pada langkah selanjutnya kita akan membuat solusi dalam wadah terpisah. Larutan ini sering disebut buffer lisis di lingkungan kimia akademik.

Untuk membuat buffer lisis kita harus mengambil cairan atau sabun cuci dan secangkir air mineral, dan mengencerkannya. Jika itu cairan, dua semburannya sudah cukup untuk mewarnai air. Jika itu deterjen bubuk, satu sendok makan sudah cukup.

Deterjen akan menjalankan fungsi menyeret lipid (sejenis lemak) dan protein (sejenis makronutrien esensial) yang larut dalam lipid. Kita juga harus menambahkan dua sendok teh garam dan enam sendok teh soda kue ke dalam campuran ini. Natrium dalam kedua senyawa ini, dengan ion positifnya, memfasilitasi integritas untaian yang membentuk DNA. Bikarbonat khususnya akan bertugas menetralkan pH larutan, untuk mencegah kerusakan DNA. Untaian DNA sekarang tidak terlindungi karena telah dilucuti dari lipid yang digunakan untuk melapisinya.

• Kami sekarang akan menggunakan metode pemisahan fisik. Yang perlu kita lakukan adalah menambahkan bahan biologis yang kita ekstrak pada langkah 1 ke dalam larutan deterjen kita. Kita mengambil empat sendok makan dan mencampurnya setidaknya selama tiga menit, dengan maksimal lima menit.

Dengan kertas dapur atau saringan kopi sebagai saringan dasar dan bantuan corong, kami menempatkan salah satu saringan ini di corong dan menuangkan cairan campuran kami ke dalam wadah. Dari campuran inilah kita akhirnya akan mengekstraksi sampel DNA untuk diamati. 

Pada titik ini kami akan memiliki solusi kami dalam fase air dan kami dapat dengan mudah mengumpulkan materi genetik kami. Larutannya mengandung RNA, DNA, dan beberapa protein yang larut dalam air.

pemisahan kimia

Sekarang kami akan menjelaskan metode pemisahan kimia, dengan memanfaatkan karakteristik kimia dari molekul bahan biologis yang akan kami pisahkan. Kami akan menggunakan 5 ml larutan yang baru saja kami saring. Kami mencampur dengan sejumlah alkohol dingin yang volumenya tiga kali lipat, dalam hal ini, 15 ml. Suhu alkohol yang dingin akan menjamin kinerja metode yang lebih baik. Karena bagian dari larutan biologis yang mengandung DNA tidak larut dalam alkohol, kita akan melihat bagaimana ia menggumpal dan terpisah dari unsur lain, membentuk lapisan yang mudah dikenali dengan mata telanjang.

Penting untuk diperhatikan bahwa alkohol harus ditambahkan secara perlahan, sebaiknya dengan menggesernya di sepanjang tepi wadah tempat larutan encer menunggu. Kami juga berusaha untuk tidak merusak DNA, yang mungkin ingin kami lihat di bawah mikroskop nanti.

Sekarang kita dapat membedakan larutan keruh yang membawa DNA sampel kita, kita akan melanjutkan untuk mengekstraknya dari media berair. Kami mengambil sedotan dan memasukkannya ke dalam media air sampai menyentuh larutan yang telah disiapkan sebelumnya. Segera setelah itu, kami menutup ujung luar sedotan dengan jari untuk menutupi kebocoran udara dan berfungsi untuk menahan larutan. Jika kita tidak dapat memperoleh larutan untuk melekat pada ujung sedotan, kita mencabutnya tanpa pernah melepaskan jari kita dari ujung yang lain dan melanjutkan proses tersebut, memastikan bahwa sedotan setidaknya telah terlihat masuk ke dalam media padat yang mengandung materi genetik. Kami meletakkan jari kami di ujung yang berlawanan, menutupinya dengan baik, dan mencoba sedikit demi sedikit untuk mengekstrak media ini dari larutan berair, perlahan-lahan menggerakkan sedotan ke luar.

Kemungkinan kita akan kesulitan menangkap larutan terakhir ini, jadi jika kita tidak berhasil dengan metode sebelumnya, kita dapat menggunakan jarum rajut dengan ujung kaitnya ke bawah untuk mengekstrak bagian larutan yang kental ini dari media berair.

Kami sekarang memiliki solusi DNA tanaman kami yang siap untuk dilihat di bawah mikroskop. Disarankan untuk segera meletakkannya di cawan Petri atau alat serupa untuk menghindari kontaminasi.

Referensi

Mendidik dan Menciptakan. (s/f). Bagaimana cara mengekstrak DNA dari tumbuhan? Tersedia di: https://www.educaycrea.com/2015/09/como-extraer-el-adn-de-un-vegetal/

Ochoa, J. (2010). Ekstraksi DNA dengan bahan dapur. Tersedia: https://www.youtube.com/watch?v=PkjtFM_UVxk&t=243s