Tabla de Contenidos
Ez az egyik legismertebb eljárás a növényi genetikai anyag kinyerésére és mikroszkóp alatti megfigyelésére. Készíthető paradicsommal, maracujával vagy más gyümölccsel is. Ebben az esetben banánt használunk, mivel kísérletünkben az egyszerű kezelési mód és a zúzásához szükséges néhány lépés szükséges.
A DNS kinyeréséhez útifűből vagy banánból a következőkre lesz szüksége:
- Egy útifű vagy banán.
- Nagyon éles kés.
- Egy villa vagy egy burgonyanyomó.
- Folyékony mosószer vagy mosószappan.
- Ásványvíz.
- Egy kis só.
- Szódabikarbóna.
- Egy tölcsér.
- Konyhai papír vagy papírszűrők.
- Nagyon hideg alkohol.
- Konténerek bármilyen anyagból a lépések végrehajtásához. Egyre szükség lesz a tört banánhoz, egy másikra a szappanhoz és a nátriumhoz. Hasznos, ha a végső keveréket egy átlátszó edényben készíti, ahol kívülről jól látható a tartalom.
- Üveg vagy műanyag szívószál, lehetőleg átlátszó. Alternatív megoldásként az is jó ötlet, ha van kéznél egy horogvégű kötőtű.
Ne felejtse el kerülni a szennyezett edények használatát a gyümölcs összezúzásához. Egy sajtreszelő például nyomokban tartalmazhat zsírt használat közben, és nem akarjuk, hogy ezek beszennyezzék a végső mintát.
Lépések
- Az első lépésben a banánt apró darabokra vágjuk. Ezután célszerű a banánt összetörni, hogy püré legyen. Ezzel feltöröd ennek a gyümölcsnek a DNS-t tartalmazó sejtjeit.
- Figyelembe véve, hogy a sejteket általában lipidmembrán borítja, további módszerre lesz szükségünk azok alaposabb feltöréséhez. Ehhez a következő lépésben egy külön edényben oldatot készítünk. Ezt a megoldást gyakran nevezik lízispuffernek az akadémiai kémiai körökben.
A lízispuffer elkészítéséhez vegyünk folyékony vagy mosószappant és egy csésze ásványvizet, és hígítsuk fel. Ha ez a folyadék, akkor abból két sugár elegendő a víz színezéséhez. Ha poros mosószerről van szó, egy púpozott evőkanál is elegendő.
A mosószer a lipidekben oldódó lipidek (amelyek egyfajta zsír) és fehérjék (egyfajta esszenciális makrotápanyag) funkcióját fogja ellátni. Ehhez a keverékhez két teáskanál sót és hat teáskanál szódabikarbónát is kell adnunk. A két vegyületben lévő nátrium pozitív ionjaival elősegíti a DNS-t alkotó szálak integritását. A bikarbonát különösen az oldat pH-jának semlegesítéséért lesz felelős, hogy megakadályozza a DNS károsodását. A DNS-szálak ma már nem védettek, mert megfosztották azokat a lipideket, amelyek korábban bevonták őket.
- Most egy fizikai elválasztási módszerhez fogunk folyamodni. Csak annyit kell tennünk, hogy a mosószeres oldatunkhoz hozzáadjuk az 1. lépésben kinyert biológiai anyagot. Fogunk négy evőkanálnyit, és legalább három percig, de legfeljebb öt percig keverjük.
A konyhai papírral vagy a kávéfilterekkel, mint kezdetleges szűrővel és egy tölcsér segítségével a tölcsérbe helyezzük az egyik ilyen szűrőt, és a keverékünk folyadékát az edénybe öntjük. Ebből a keverékből fogjuk végül kinyerni a megfigyelendő DNS-mintát.
Ekkor az oldatunk vizes fázisban lesz, és könnyen összegyűjthetjük genetikai anyagunkat. Az oldat RNS-t, DNS-t és néhány vízben oldódó fehérjét tartalmaz.
kémiai elválasztás
Most elmagyarázzuk a kémiai elválasztási módszert, kihasználva az elválasztandó biológiai anyag molekuláinak kémiai jellemzőit. Az imént leszűrt oldatból 5 ml-t használunk fel. Olyan mennyiségű hideg alkohollal keverjük össze, ami háromszorosára növeli, jelen esetben 15 ml. Az alkohol hideg hőmérséklete garantálja a módszer jobb teljesítményét. Mivel a biológiai oldat DNS-t tartalmazó része nem oldódik alkoholban, látni fogjuk, hogyan agglomerálódik és válik el a többi elemtől, így szabad szemmel is könnyen felismerhető réteget képez.
Fontos figyelembe venni, hogy az alkoholt lassan kell adagolni, lehetőleg a tartály szélei mentén csúsztatva, ahol a vizes oldat vár. Arra is törekszünk, hogy ne sértsük meg a DNS-t, amit később érdemes lehet mikroszkóp alatt megnézni.
Most, hogy meg tudjuk különböztetni a mintánk DNS-ét hordozó zavaros oldatot, kivonjuk a vizes közegből. Fogjuk a szalmát, és addig vezetjük a vizes közegbe, amíg hozzá nem ér az előzőleg elkészített oldathoz. Közvetlenül ezután ujjal letakarjuk a szívószál külső végét, hogy elfedjük a légszivárgást és az oldat megtartását szolgálja. Ha nem tudjuk elérni, hogy az oldat hozzátapadjon a szívószál hegyéhez, úgy húzzuk ki, hogy az ujjunkat soha ne húzzuk le a másik végéről, és folytassuk a folyamat megismétlését, ügyelve arra, hogy a szalma legalább láthatóan bekerüljön a sűrű táptalajba. az anyag.genetikai. Ujjunkat a másik végére helyezzük, jól letakarva, és a szalmát lassan kifelé mozgatva próbáljuk apránként kivonni ezt a közeget a vizes oldatból.
Valószínűleg ezt az utolsó megoldást nehezen fogjuk megfogni, ezért ha az előző módszerrel nem járunk sikerrel, a kötőtűvel a kampós hegyével lefelé kinyerhetjük az oldatnak ezt a vastag részét a vizes közegből.
Növényi DNS-oldatunk készen áll a mikroszkóp alatti megtekintésre. A szennyeződés elkerülése érdekében ajánlatos azonnal Petri-csészébe vagy hasonló edénybe helyezni.
Hivatkozások
Oktatás és Teremtés. (s/f). Hogyan lehet DNS-t kinyerni egy növényből? Elérhető: https://www.educaycrea.com/2015/09/como-extraer-el-adn-de-un-vegetal/
Ochoa, J. (2010). DNS kivonás konyhai anyaggal. Elérhető: https://www.youtube.com/watch?v=PkjtFM_UVxk&t=243s
