कैसे एक केले से डीएनए निकालने के लिए

यह पौधे की आनुवंशिक सामग्री को निकालने और माइक्रोस्कोप के तहत इसका निरीक्षण करने में सक्षम होने के लिए सबसे लोकप्रिय ज्ञात प्रक्रियाओं में से एक है। इसे टमाटर, पैशन फ्रूट या अन्य फलों से भी बनाया जा सकता है। एक केले का उपयोग किया जाता है, इस मामले में, इसे संभालने के सरल तरीके और हमारे प्रयोग में इसे कुचलने के लिए आवश्यक कुछ कदमों के कारण।

केले या केले से डीएनए निकालने के लिए आपको चाहिए:

• एक केला या केला।
• बहुत तेज चाकू।
• एक कांटा या एक आलू मैशर।
• तरल डिटर्जेंट या कपड़े धोने का साबुन।
• मिनरल वॉटर।
• थोड़ा सा नमक।
• सोडियम बाईकारबोनेट।
• एक फ़नल।
• किचन पेपर या पेपर फिल्टर।
• बहुत ठंडी शराब।
• चरणों को पूरा करने के लिए किसी भी सामग्री के कंटेनर। एक की जरूरत मैश किए हुए केले के लिए और दूसरी साबुन और सोडियम के लिए होगी। यह उपयोगी है यदि आप अंतिम मिश्रण को एक स्पष्ट कंटेनर में बनाते हैं जहां आप आसानी से बाहर की सामग्री देख सकते हैं।
• कांच या प्लास्टिक पुआल, अधिमानतः पारदर्शी। वैकल्पिक रूप से, हाथ पर हुक बिंदु के साथ बुनाई सुई रखना भी एक अच्छा विचार है।

फलों को कुचलने के लिए दूषित हो सकने वाले बर्तनों का उपयोग करने से बचें। एक पनीर grater, उदाहरण के लिए, उपयोग किए जाने पर वसा के निशान हो सकते हैं, और हम नहीं चाहते कि ये अंतिम नमूने को दूषित करें।

कदम

• पहले चरण में केले को छोटे-छोटे टुकड़ों में काटना होगा। अगला, केले को कुचलने के लिए सुविधाजनक है ताकि यह प्यूरी बन जाए। ऐसा करने से आप इस फल की उन कोशिकाओं को तोड़ रहे होंगे जिनमें डीएनए होता है।
• यह ध्यान में रखते हुए कि कोशिकाएं आमतौर पर एक लिपिड झिल्ली से ढकी होती हैं, हमें उन्हें और अच्छी तरह से तोड़ने के लिए एक अतिरिक्त विधि की आवश्यकता होगी। इसके लिए अगले स्टेप में हम एक अलग कंटेनर में घोल बनाएंगे। अकादमिक रसायन हलकों में इस समाधान को अक्सर लिसीज़ बफर कहा जाता है।

लिसीज़ बफर बनाने के लिए हमें तरल या कपड़े धोने का साबुन और एक कप मिनरल वाटर लेना चाहिए और इसे पतला करना चाहिए। यदि यह तरल है, तो इसकी दो धाराएँ पानी को रंगने के लिए पर्याप्त होंगी। यदि यह पाउडर डिटर्जेंट है, तो एक बड़ा चमचा पर्याप्त होगा।

डिटर्जेंट लिपिड (जो एक प्रकार का वसा होता है) और प्रोटीन (एक प्रकार का आवश्यक मैक्रोन्यूट्रिएंट) को खींचने का कार्य करता है जो लिपिड में घुलनशील होते हैं। हमें इस मिश्रण में दो चम्मच नमक और छह चम्मच बेकिंग सोडा भी मिलाना है। इन दो यौगिकों में सोडियम, इसके सकारात्मक आयनों के साथ, डीएनए बनाने वाले स्ट्रैंड्स की अखंडता को सुगम बनाता है। डीएनए को क्षतिग्रस्त होने से बचाने के लिए बाइकार्बोनेट विशेष रूप से समाधान के पीएच को बेअसर करने के लिए जिम्मेदार होगा। डीएनए स्ट्रैंड्स अब असुरक्षित हैं क्योंकि उन्हें उन लिपिडों से छीन लिया गया है जो उन्हें कोट करते थे।

• अब हम भौतिक पृथक्करण विधि का सहारा लेंगे। हमें जो करने की आवश्यकता है वह हमारे डिटर्जेंट समाधान में उस जैविक सामग्री को जोड़ना है जिसे हमने चरण 1 में निकाला था। हम चार बड़े चम्मच लेते हैं और उन्हें कम से कम तीन मिनट के लिए मिलाते हैं, अधिकतम पांच मिनट के लिए।

किचन पेपर या कॉफी फिल्टर के साथ अल्पविकसित फिल्टर के रूप में और एक कीप की मदद से हम इनमें से एक फिल्टर को कीप में रखते हैं और हमारे मिश्रण के तरल को कंटेनर में डालते हैं। यह इस मिश्रण से होगा कि हम अंत में देखे जाने वाले डीएनए नमूने को निकालेंगे। 

इस बिंदु पर हमारे पास एक जलीय चरण में हमारा समाधान होगा और हम अपनी आनुवंशिक सामग्री को आसानी से एकत्र कर सकते हैं। समाधान में आरएनए, डीएनए और कुछ प्रोटीन होते हैं जो पानी में घुलनशील होते हैं।

रासायनिक पृथक्करण

अब हम जैविक सामग्री के अणुओं की रासायनिक विशेषताओं का लाभ उठाते हुए रासायनिक पृथक्करण विधि की व्याख्या करेंगे, जिसे हम अलग कर रहे हैं। हम उस घोल के 5 मिलीलीटर का उपयोग करेंगे जिसे हमने अभी फ़िल्टर किया है। हम ठंडे अल्कोहल की मात्रा के साथ मिलाते हैं जो इसे मात्रा में तीन गुना कर देता है, इस मामले में, 15 मिली। अल्कोहल का ठंडा तापमान विधि के बेहतर प्रदर्शन की गारंटी देगा। क्योंकि डीएनए युक्त जैविक समाधान का हिस्सा शराब में घुलनशील नहीं है, हम देखेंगे कि यह कैसे ढेर हो जाता है और अन्य तत्वों से अलग हो जाता है, जिससे एक ऐसी परत बन जाती है जिसे नग्न आंखों से आसानी से पहचाना जा सकता है।

यह विचार करना महत्वपूर्ण है कि शराब को धीरे-धीरे जोड़ा जाना चाहिए, अधिमानतः इसे कंटेनर के किनारों पर स्लाइड करके जहां जलीय घोल प्रतीक्षा कर रहा है। हम डीएनए को नुकसान नहीं पहुंचाने की भी कोशिश कर रहे हैं, जिसे हम बाद में माइक्रोस्कोप से देखना चाहेंगे।

अब जब हम अपने नमूने के डीएनए को ले जाने वाले धुंधले घोल को अलग कर सकते हैं, तो हम इसे जलीय माध्यम से निकालने के लिए आगे बढ़ेंगे। हम पुआल लेते हैं और इसे जलीय माध्यम में तब तक पेश करते हैं जब तक कि यह पहले से तैयार घोल को न छू ले। इसके तुरंत बाद, हम पुआल के बाहरी छोर को एक उंगली से ढक देते हैं ताकि हवा के रिसाव को कवर किया जा सके और यह घोल को पकड़ने का काम करे। यदि हम पुआल की नोक का पालन करने के लिए समाधान प्राप्त करने में असमर्थ हैं, तो हम इसे दूसरे छोर से अपनी उंगली को हटाए बिना निकालते हैं और प्रक्रिया को दोहराते हैं, यह सुनिश्चित करते हुए कि पुआल कम से कम दिखाई देने वाले घने माध्यम में प्रवेश कर गया है सामग्री। आनुवंशिक। हम अपनी उंगली को विपरीत छोर पर रखते हैं, इसे अच्छी तरह से ढकते हैं, और थोड़ा-थोड़ा करके इस माध्यम को जलीय घोल से निकालने की कोशिश करते हैं, धीरे-धीरे पुआल को बाहर की ओर ले जाते हैं।

यह संभावना है कि हमें इस अंतिम समाधान को पकड़ने में कठिन समय होगा, इसलिए यदि हम पिछली विधि के साथ सफल नहीं होते हैं, तो हम जलीय माध्यम से समाधान के इस मोटे हिस्से को निकालने के लिए बुनाई सुई को उसके हुक बिंदु के साथ नीचे की ओर उपयोग कर सकते हैं।

अब हमारे पास हमारा संयंत्र डीएनए समाधान माइक्रोस्कोप के नीचे देखने के लिए तैयार है। संदूषण से बचने के लिए इसे तुरंत पेट्री डिश या इसी तरह के बर्तन में रखने की सलाह दी जाती है।

संदर्भ

शिक्षित और बनाएँ। (एस / एफ)। पौधे से डीएनए कैसे निकाला जाता है? यहां उपलब्ध है: https://www.educaycrea.com/2015/09/como-extraer-el-adn-de-un-vegetal/

ओचोआ, जे। (2010)। रसोई सामग्री के साथ डीएनए निष्कर्षण। उपलब्ध: https://www.youtube.com/watch?v=PkjtFM_UVxk&t=243s