Tabla de Contenidos
Αυτή είναι μια από τις πιο γνωστές διαδικασίες για την εξαγωγή φυτικού γενετικού υλικού και τη δυνατότητα παρατήρησής του κάτω από ένα μικροσκόπιο. Μπορεί επίσης να γίνει με ντομάτες, φρούτα του πάθους ή άλλα φρούτα. Μια μπανάνα χρησιμοποιείται, σε αυτή την περίπτωση, λόγω του απλού τρόπου χειρισμού της και των λίγων βημάτων που απαιτούνται για να τη συνθλίψουμε στο πείραμά μας.
Για να εξαγάγετε DNA από ένα πλατανό ή μπανάνα, χρειάζεστε:
- Ένα πλατανό ή μπανάνα.
- Πολύ κοφτερό μαχαίρι.
- Ένα πιρούνι ή έναν πουρέ πατάτας.
- Υγρό απορρυπαντικό ή σαπούνι πλυντηρίου.
- Μεταλλικό νερό.
- Λίγο αλάτι.
- Διττανθρακικό νάτριο.
- Ένα χωνί.
- Χαρτί κουζίνας ή χάρτινα φίλτρα.
- Πολύ κρύο αλκοόλ.
- Δοχεία από οποιοδήποτε υλικό για την εκτέλεση των βημάτων. Ένα θα χρειαστεί για την πολτοποιημένη μπανάνα και ένα άλλο για το σαπούνι και το νάτριο. Είναι χρήσιμο αν κάνετε το τελικό μείγμα σε ένα διαφανές δοχείο όπου μπορείτε να δείτε εύκολα το περιεχόμενο από έξω.
- Καλαμάκι από γυαλί ή πλαστικό, κατά προτίμηση διαφανές. Εναλλακτικά, είναι επίσης μια καλή ιδέα να έχετε στο χέρι μια βελόνα πλεξίματος με ένα άγκιστρο.
Θυμηθείτε να αποφύγετε τη χρήση σκευών που θα μπορούσαν να είναι μολυσμένα για να συνθλίψετε τα φρούτα. Ένας τρίφτης τυριού, για παράδειγμα, θα μπορούσε να έχει ίχνη λίπους όταν χρησιμοποιείται και δεν θέλουμε αυτά να μολύνουν το τελικό δείγμα.
Βήματα
- Το πρώτο βήμα θα αποτελείται από το κόψιμο της μπανάνας σε μικρά κομμάτια. Στη συνέχεια, βολεύει να θρυμματίσετε την μπανάνα ώστε να γίνει πουρές. Κάνοντας αυτό θα σπάσετε τα κύτταρα αυτού του φρούτου, τα οποία περιέχουν το DNA.
- Λαμβάνοντας υπόψη ότι τα κύτταρα καλύπτονται γενικά από μια λιπιδική μεμβράνη, θα χρειαστούμε μια πρόσθετη μέθοδο για να τα σπάσουμε πιο διεξοδικά. Για αυτό, στο επόμενο βήμα θα φτιάξουμε ένα διάλυμα σε ξεχωριστό δοχείο. Αυτή η λύση συχνά ονομάζεται ρυθμιστικό λύσης στους κύκλους της ακαδημαϊκής χημείας.
Για να φτιάξουμε το ρυθμιστικό διάλυμα λύσης πρέπει να πάρουμε υγρό ή σαπούνι πλυντηρίου και ένα φλιτζάνι μεταλλικό νερό και να το αραιώσουμε. Αν είναι το υγρό, δύο πίδακες του θα αρκούν για να χρωματίσει το νερό. Εάν πρόκειται για απορρυπαντικό σε σκόνη, αρκεί μια γεμάτη κουταλιά της σούπας.
Το απορρυπαντικό θα εκτελέσει τη λειτουργία έλξης λιπιδίων (τα οποία είναι ένας τύπος λίπους) και πρωτεϊνών (ένας τύπος βασικού μακροθρεπτικού συστατικού) που είναι διαλυτά στα λιπίδια. Πρέπει επίσης να προσθέσουμε σε αυτό το μείγμα δύο κουταλάκια του γλυκού αλάτι και έξι κουταλάκια του γλυκού μαγειρική σόδα. Το νάτριο σε αυτές τις δύο ενώσεις, με τα θετικά του ιόντα, διευκολύνει την ακεραιότητα των κλώνων που αποτελούν το DNA. Το διττανθρακικό συγκεκριμένα θα είναι υπεύθυνο για την εξουδετέρωση του pH του διαλύματος, για να αποτρέψει την καταστροφή του DNA. Οι κλώνοι του DNA είναι πλέον απροστάτευτοι επειδή έχουν απογυμνωθεί από τα λιπίδια που τους επένδυαν.
- Τώρα θα καταφύγουμε σε μια μέθοδο φυσικού διαχωρισμού. Αυτό που πρέπει να κάνουμε είναι να προσθέσουμε στο απορρυπαντικό μας το βιολογικό υλικό που βγάλαμε στο βήμα 1. Παίρνουμε τέσσερις κουταλιές της σούπας και τις ανακατεύουμε για τουλάχιστον τρία λεπτά, το πολύ πέντε λεπτά.
Με το χαρτί κουζίνας ή τα φίλτρα του καφέ ως υποτυπώδες φίλτρο και με τη βοήθεια ενός χωνιού τοποθετούμε ένα από αυτά τα φίλτρα στο χωνί και ρίχνουμε το υγρό του μείγματος μας στο δοχείο. Από αυτό το μείγμα θα εξαγάγουμε τελικά το δείγμα DNA που θα παρατηρήσουμε.
Σε αυτό το σημείο θα έχουμε το διάλυμά μας σε υδατική φάση και μπορούμε εύκολα να συλλέξουμε το γενετικό μας υλικό. Το διάλυμα περιέχει RNA, DNA και μερικές πρωτεΐνες που είναι διαλυτές στο νερό.
χημικός διαχωρισμός
Τώρα θα εξηγήσουμε τη μέθοδο χημικού διαχωρισμού, εκμεταλλευόμενοι τα χημικά χαρακτηριστικά των μορίων του βιολογικού υλικού που θα διαχωρίσουμε. Θα χρησιμοποιήσουμε 5 ml από το διάλυμα που μόλις φιλτράραμε. Ανακατεύουμε με ποσότητα κρύου αλκοόλ που την τριπλασιάζει σε όγκο, στην προκειμένη περίπτωση 15 ml. Η ψυχρή θερμοκρασία του αλκοόλ θα εγγυηθεί καλύτερη απόδοση της μεθόδου. Επειδή το τμήμα του βιολογικού διαλύματος που περιέχει DNA δεν είναι διαλυτό στο αλκοόλ, θα δούμε πώς συσσωματώνεται και διαχωρίζεται από τα άλλα στοιχεία, σχηματίζοντας ένα στρώμα που είναι εύκολα αναγνωρίσιμο με γυμνό μάτι.
Είναι σημαντικό να λάβετε υπόψη ότι η αλκοόλη πρέπει να προστίθεται αργά, κατά προτίμηση σύροντάς την κατά μήκος των άκρων του δοχείου όπου περιμένει το υδατικό διάλυμα. Προσπαθούμε επίσης να μην καταστρέψουμε το DNA, το οποίο μπορεί να θέλουμε να δούμε αργότερα κάτω από ένα μικροσκόπιο.
Τώρα που μπορούμε να διακρίνουμε το θολό διάλυμα που φέρει το DNA του δείγματός μας, θα προχωρήσουμε στην εξαγωγή του από το υδατικό μέσο. Παίρνουμε το καλαμάκι και το εισάγουμε στο υδατικό μέσο μέχρι να ακουμπήσει το προηγουμένως παρασκευασμένο διάλυμα. Αμέσως μετά σκεπάζουμε με ένα δάχτυλο την εξωτερική άκρη του καλαμακιού για να καλύψει τη διαρροή αέρα και να χρησιμεύει για να συγκρατεί το διάλυμα. Εάν δεν καταφέρουμε να κολλήσουμε το διάλυμα στην άκρη του καλαμακιού, το εξάγουμε χωρίς να αφαιρέσουμε ποτέ το δάχτυλό μας από την άλλη άκρη και επαναλαμβάνουμε τη διαδικασία, φροντίζοντας να έχει εισέλθει τουλάχιστον εμφανώς το καλαμάκι στο πυκνό υλικό που περιέχει το υλικό.γενετικό. Τοποθετούμε το δάχτυλό μας στο αντίθετο άκρο σκεπάζοντάς το καλά και προσπαθούμε σιγά σιγά να βγάλουμε αυτό το μέσο από το υδατικό διάλυμα, μετακινώντας σιγά σιγά το καλαμάκι προς τα έξω.
Είναι πιθανό ότι θα δυσκολευτούμε να πιάσουμε αυτό το τελευταίο διάλυμα, οπότε αν δεν τα καταφέρουμε με την προηγούμενη μέθοδο, θα μπορούσαμε να χρησιμοποιήσουμε τη βελόνα πλεξίματος με το άγκιστρο προς τα κάτω για να εξαγάγουμε αυτό το παχύ μέρος του διαλύματος από το υδατικό μέσο.
Τώρα έχουμε έτοιμο το φυτικό μας διάλυμα DNA για προβολή στο μικροσκόπιο. Συνιστάται η άμεση τοποθέτηση του σε πιάτο Petri ή παρόμοιο σκεύος για αποφυγή μόλυνσης.
βιβλιογραφικές αναφορές
Εκπαιδεύστε και Δημιουργήστε. (α/φ). Πώς να εξαγάγετε DNA από ένα φυτό; Διαθέσιμο στη διεύθυνση: https://www.educaycrea.com/2015/09/como-extraer-el-adn-de-un-vegetal/
Ochoa, J. (2010). Εξαγωγή DNA με υλικό κουζίνας. Διαθέσιμο: https://www.youtube.com/watch?v=PkjtFM_UVxk&t=243s
